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GSZD改善GA大鼠关节症状，减轻骨侵蚀
踝关节肿胀是GA疾病中常见且显著的临床表现。为准确评估其程度，研究采取测量踝周长的方法，以此量化对照组与治疗组大鼠的踝关节肿胀程度（ASD）（图2A）。与CON组相比，关节内注射尿酸结晶（MSU）的大鼠在各个观测时间点的ASD均呈现出显著增长（p<0.05）。然而，MSU注射后的2、4、8、12、24和48小时，GSZD（3.2或1.6g/kg）能够显著减轻大鼠的ASD（p<0.05）（图2B）。同样，双氯芬酸钠治疗组（DS，3 mg/kg/周）在MSU注射后的8、24和48小时也表现出对水肿形成的缓解效果，且此效果在实验期间内得以维持。
为了更全面地评估其药效学效果，研究进一步检测了血清中炎症因子（LPS、TNF-α 和 IL-1β）以及GA的关键指标（UA）的水平。与CON组相比，MOD组中LPS、TNF-α、IL-1β 和 UA的血清水平均显著升高（p<0.05）（图2D）。然而，GSZD的暴露能够有效防止这些指标的异常升高（p<0.05）。
基于关节症状和骨质侵蚀的评估结果，研究确认GSZD能够显著降低ASD、减轻骨质侵蚀，并下调TNF-α 和 IL-1β的表达。此外，高剂量的GSZD在药效学上表现出比低剂量和中剂量更为显著的效果。
图2 GSZD对痛风性关节炎大鼠关节症状及骨质侵蚀的药理作用
肠道菌群、代谢物和 GA 相关指标之间的相关性分析
研究发现，GSZD能够有效调节GA大鼠的肠道菌群组成，并影响血清代谢组学。为此，该研究采用了Spearman相关性分析，并通过可视化相关性热图来深入探究血清代谢物与不同门、科、属菌群之间的相关性，以及微生物群代谢物与临床指标之间的潜在关联，特别是与UA、LPS、TNF-α和IL-1β等临床指标的相关性。
在门水平上，12(R)-hete、enantio-paf c-16、1-硬脂酰甘油磷酸胆碱和lysoPC(17:0)与变形菌门呈现正相关关系，而三氯乙醇葡萄糖醛酸苷、lysoPC(18:1(9Z))、lysoPC(16:1(9Z))和pc(18:1/0:0)则与变形菌门呈负相关（图3A）；在科水平上，16-羟基-10-氧代十六烷酸、serratol、15-酮-13,14-二氢前列腺素a2、8-异丙基苯甲酸1、氟利昂酸和前列腺素f1a与毛螺菌科存在正相关关系，而胆酸、溶血PC(15:0)和PC(16:0/0:0)则与毛螺菌科呈负相关（图3B）；在属水平上，溶血PC(18:0)、12(R)-hete和enantio-paf c-16与Turicibacter属正相关，而serratol、氟利昂酸、5-乙酰氧基二氢茶螺烷和薄荷碳酸乙二醇酯则与其呈负相关（图3C）。
图3 肠道菌群、血清代谢物与 GA 相关临床因素相关性分析热
此外，在肠道菌群与临床因素相关性的分析中，研究观察到肠道菌群能够显著影响临床因素的表达，其中乳酸杆菌与所有临床因素均呈正相关，而Turicibacter则与除LPS外的多数临床因素呈负相关（图3D）。同样，代谢物也能显著影响临床因素的表达，例如氟离子酸的增加会导致临床因素表达的上调，而溶菌酶pc(16:1(9z))的增加则会下调临床因素的表达（图3E）。充分表明血清代谢物的变化与肠道菌群的改变以及GA相关的临床因素之间存在密切的关联（图4）。
图4 GA潜在代谢途径及GSZD治疗作用
GSZD改善嘌呤代谢、抑制炎症
肠道菌群与血清代谢组学分析显示，GSZD通过调整肠道菌群结构，优化了嘌呤代谢等生物学过程，从而实现了减轻炎症反应的药效学功能。研究选择了相关基因和蛋白质对此进行验证。
结果显示，与嘌呤代谢紧密相关的腺核苷去氨酶（ADA）和鸟嘌呤脱氨酶（GDA）这两种关键酶在MOD状态下表达显著上升，而在GSZD作用下则呈下降趋势（图5A），这强烈提示GSZD可能通过抑制这些关键酶的活性来降低尿酸的生成。此外，GSZD显著增加了回肠组织中Occludin和Zo-1的表达（图5B），这一发现暗示GSZD可能强化了肠道屏障的紧密连接功能。
最后，为了验证GSZD在GA治疗中能否有效减轻炎症反应，研究选择了LPS的靶受体TLR4炎症通路作为研究对象，检测了其蛋白活化情况。结果显示，MOD大鼠踝关节组织中TLR4、MYD88、p-NF-κB P65蛋白的表达明显高于CON组，而经过GSZD干预后，GA模型大鼠踝关节组织中上述蛋白的表达均有所下调（图5C）。结果进一步支持了GSZD在GA治疗中减轻炎症反应的潜在作用。
图5 验证实验结果及本研究的图示说明
研究表明，GA与肠道菌群和血清代谢的紊乱状态存在显著的相关性。而GSZD在改善这一紊乱状态方面展现出了显著效果。具体而言，GSZD通过提升参与尿酸转运的菌群的丰富度等来有效缓解了GA所引发的问题。
Bian M, Zhu C, Nie A, Zhou Z. Guizhi Shaoyao Zhimu Decoction ameliorates gouty arthritis in rats via altering gut microbiota and improving metabolic profile. Phytomedicine. 2024 Aug;131:155800. doi: 10.1016/j.phymed.2024.155800
