背景

阿尔茨海默病（AD）是一种神经退行性疾病，神经保护是改善AD预后的重要途径。知母（RAA）是一种常用的中药，具有一定的神经保护作用，但其抗AD的机制有待进一步探讨。
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目的

探讨RAA对TMT诱导的AD小鼠的神经保护作用机制。

方法

通过腹腔注射TMT建立AD小鼠模型。采用Morris水迷宫（Morris Water Maze，MWM）和y迷宫（Y-maze）测试评估RAA对大鼠学习记忆的改善作用。采用血红素-伊红（HE）染色、尼氏染色、TUNEL染色观察RAA的神经保护作用。采用UPLC-Q-Orbitrap ms检测血清中含有RAA的组分（RAA-S），通过网络药理学和分子对接预测潜在靶点。

采用ELISA试剂盒检测血清活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）水平。利用l-谷氨酸（L-Glu）损伤的HT22海马神经元细胞系进一步阐明RAA的作用机制。采用2'-7'-二氯双氢荧光素（DCFH-DA）荧光探针和流式细胞术检测HT22细胞的ROS水平。流式细胞术检测HT22细胞凋亡。Western blotting检测MAP2、GAP-43、Nrf2、Keap1、HO-1、Bax、Bcl-2蛋白的表达。采用免疫荧光染色法观察Nrf2核易位。

 

结果

RAA显著增加了小鼠在W区的停留时间，提高了TMT处理小鼠的正确交替率。RAA保留了神经细胞的完整和有序排列。RAA-S共检测到12种成分。AKT1、PPARG、CASP3、STAT3、HSP90AA1和NFE2L2（Nrf2）参与RAA-S靶点通路网络。分子对接发现Nrf2与RAA-S中各组分的平均结合能最高。

在体内，RAA提高了MAP2，GAP-43，Nrf2和HO-1水平，以及GPx，GSH和SOD活性。此外，RAA降低了血清中MDA和ROS的水平，而这些水平已经被TMT升高。在体外，RAA-S可减少TMT引起的HT22细胞凋亡和ROS积累。此外，RAA-S可促进L-Glu损伤HT22细胞中N-Nrf2和HO-1的表达。

结论

RAA可减轻TMT和L-Glu诱导的AD模型小鼠氧化应激，其潜在机制与Nrf2/Keap1-HO-1通路的激活有关。

 

来源｜中医科新前沿
作者｜梅斯医学
编辑 | 竹子