肺动脉高压（PH）是一种由于肺血管的功能和结构发生改变，导致肺血管阻力升高和重塑的心血管疾病。平滑肌细胞的异常增殖引起肺动脉壁增厚和管腔变窄，推动了血管的病理性重塑。现有研究发现非编码RNA在肺动脉平滑肌细胞增殖过程中发挥重要作用，但其上下游机制尚未完全阐明。
2025年7月22日，哈尔滨医科大学大庆校区于航教授和朱大岭教授在Hypertension杂志（中科院1区，影响因子8.3）发表了题为“LINC00599 Promotes Pulmonary Hypertension via Liquid-Liquid Phase Separation With G3BP1 and MYH9”的论文。该研究揭示超级增强子相关的LINC00599通过m6A修饰调控应激颗粒形成介导肺动脉平滑肌细胞增殖的新机制。
首先，作者发现LINC00599在SuHx 模型小鼠肺组织和低氧 PASMCs 中表达显著上调。为了进一步探究LINC00599 在SuHx-PH 中的作用，作者构建了平滑肌特异性LINC00599 敲低的SuHx 小鼠模型和低氧 PASMCs 模型，结果显示，在体内敲低LINC00599 可以明显改善低氧导致的PH 指标，如右心室收缩压、血流动力学和血管重构的异常。体外实验也证实，敲低LINC00599 可抑制低氧诱导的 PASMCs 增殖。以上研究结果表明，LINC00599 在促进 PASMCs 增殖和肺血管重构中起关键作用。
作者通过预测发现 LINC00599 存在 m6A 修饰位点，为探究该修饰在肺动脉高压中的作用，作者对 LINC00599 的关键 m6A 位点进行突变，并构建过表达腺相关病毒转染 SuHx 小鼠。实验结果显示：对于体内敲低LINC00599 的 SuHx-PH 小鼠，在给予野生型 LINC00599 后，其肺动脉高压各项指标进一步加重；而给予 m6A 位点突变型 LINC00599 时，已改善的肺动脉高压指标未受明显影响。
图 1 低氧通过LINC00599促进SuHx小鼠肺血管重塑和PASMCs增殖
图2 过表达 m6A 位点突变型 LINC00599，无法改变敲减 LINC00599 对肺动脉高压小鼠的改善效应。
为了探究 LINC00599 参与PH的机制。作者首先对 LINC00599 进行功能富集分析，结果提示其与细胞增殖显著相关。流式细胞术、Western blot 和免疫荧光等证实，干扰LINC00599 可以逆转低氧诱导的 PASMCs 增殖；过表达野生型LINC00599明显促进常氧 PASMCs 增殖。
图3 针对LINC00599的KEGG的通路分析以及LINC00599 siRNAs和过表达质粒的作用效果。
图4 LINC00599调控低氧肺动脉平滑肌细胞增殖
为了探究LINC00599 调控PASMCs 增殖的分子机制，作者首先对LINC00599 的互作蛋白进行预测，结果显示其与应激颗粒核心蛋白G3BP1 密切相关。RIP 和RNA pull-down 证实，LINC00599 和G3BP1 相互结合。LINC00599-G3BP1的结合具有液-液相分离的特征。突变LINC00599 的m6A 位点抑制了LINC00599-G3BP1 的结合、液-液相分离的形成和低氧诱导的细胞增殖。LINC00599 通过应激颗粒调控 PASMCs 增殖。
图5 LINC00599 通过 m6A 修饰调控低氧诱导的液-液相分离介导肺动脉平滑肌增殖
为进一步探究LINC00599 如何通过应激颗粒调控细胞增殖，作者通过质谱分析筛选出与LINC00599 结合的蛋白质——肌球蛋白重链9（MYH9）。RIP 和RNA pull-down 证实，LINC00599 和MYH9 相互结合。Co-IP 证明MYH9 与G3BP1 互作。敲减MYH9 显著抑制低氧诱导的应激颗粒形成和 PASMCs 增殖。
图6 MYH9 作为 LINC00599 新的下游分子通过参与应激颗粒形成介导肺动脉平滑肌细胞增殖
最后，作者探究了低氧调控LINC00599表达的上游机制。作者首先预测出调控LINC00599 表达的超级增强子SE-2082886。通过增强子抑制剂JQ-1 和CRISPR-Cas9 特异性敲除SE-2082886，证明SE-2082886 调控LINC00599 表达。作者进一步探究了SE-2082886 调控LINC00599 表达的机制，筛选出转录因子ZNF263。通过ChIP-qPCR 证明ZNF263 通过与超级增强子的E2 增强子和LINC00599 启动子的中间区域结合介导了超级增强子对LINC00599 表达的调控。
图7 超级增强子通过转录因子 ZNF263 调控 LINC00599 表达
总结：
在本研究中，作者首次证实LINC00599 是介导肺动脉高压的关键核酸分子。其次，LINC00599 通过m6A 修饰调控胞浆应激颗粒形成介导低氧肺动脉平滑肌增殖。第三，超级增强子SE-2082886 通过转录因子ZNF263 调控LINC00599 表达。作者的研究结果揭示了LINC00599 调控细胞增殖的新模式，并为低氧性PH 提供新的核酸治疗靶点。
哈尔滨医科大学大庆校区于航教授为本文的通讯作者，朱大岭教授为共同通讯作者，研究得到了国家自然科学基金，黑龙江省自然科学基金的资助。
参考文献：Wang Y, Yin L, Zheng S, Liu A, Liu C, Bao Z, Zhu H, Zhao X, Zhao Z, Pan Y, Zhu D, Yu H. LINC00599 Promotes Pulmonary Hypertension via Liquid-Liquid Phase Separation With G3BP1 and MYH9. Hypertension. 2025 Jul 22. doi: 10.1161/HYPERTENSIONAHA.124.24511. Epub ahead of print. PMID: 40693377.
